Étude de la niche lymphatique dans un modèle ex-vivo de LLC

Description

Introduction :
La LLC est la plus fréquente des leucémies de l'adulte. Malgré un arsenal thérapeutique largement développé, de nombreuses résistances émergent et sont responsables de rechutes. Ceci s'explique en partie par la persistance dans des niches de cellules leucémiques résistantes. Il n'existe pas à ce jour de modèle ex-vivo de ganglion lymphatique de LLC permettant d'étudier la pathologie avec son micro-environnement spécifique.
Nos objectifs étaient :
i/ De mettre au point un modèle ex-vivo de LLC en 2D puis en 3D pour reproduire la niche tumorale des cellules LLC dans le ganglion.
ii/ D'étudier ce modèle de niche lymphatique
Matériel et méthodes :
Un modèle ex-vivo a été mis au point, à partir des co-cultures de LLC avec soit des fibroblastes médullaires (HS5) pour reproduire la niche médullaire soit des fibroblastes ganglionnaires (HLF) pour reproduire la niche lymphatique. Ces co-cultures en 2D ont été stimulées par du CpG ODN et IL2 pour reproduire les signaux du microenvironnement et tester la viabilité, la prolifération, la production de cytokines, l'expression des protéines et le métabolisme énergétique. Une co-culture en 3D a été réalisée en créant des sphéroïdes de LLC à partir de la co-culture 2D.
Résultats :
La viabilité des cellules de LLC est augmentée dans les co-cultures de LLC avec HLF ou HS5 (p<0,001). La prolifération est augmentée dans les co-cultures de LLC avec HLF (p<0,001). La co-culture avec HS5 ou HLF modifie la production des cytokines, l'expression des protéines et le métabolisme. Nous avons pu produire des modèles ex-vivo en 3D de LLC et fibroblastes, marqués par un Ki-67 positif en immuno-histochimie.
Conclusion :
Les résultats déjà démontrés dans les niches médullaires se confirment dans un modèle ganglionnaire ex-vivo : la co-culture de LLC avec des HLF augmente la survie et modifie la production de cytokines et leur métabolisme. Un modèle 3D est réalisable et présente une opportunité de simuler la niche lymphatique de LLC.

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